1955年，奚美娟出生于上海近郊的一个普通工人家庭。1973年，奚美娟中学毕业，到郊区插队劳动。一个月后，上海戏剧学院招生，奚美娟考进上海戏剧学院。1977年，奚美娟分配到了上海人民艺术剧院。
1988年，中国艺术节在北京举行，上海人艺参演的剧目是《中国梦》，奚美娟担任女主角，夺得中国戏剧梅花奖。
1990年，参演首部电影《假女真情》，获得第十一届中国电影金鸡奖最佳女主角奖。
1992年7月，在电影《蒋筑英》中饰演蒋筑英的妻子路长琴。
1998年6月，与周迅主演根据毕淑敏同名小说改编的电视剧《红处方》，饰演沈若鱼一角
2000年6月，主演反腐题材电视剧《红色康乃馨》，奚美娟以反面人物形象出现，在剧中饰演大华集团董事长蓝思红。2001年，主演电视剧《再婚家庭》。
2004年2月，与贾一平、王茜主演电视剧《坐庄》，凭借《做庄》获得第五届金鹰艺术节“观众喜爱的电视剧女演员”奖；同年，担任第24届中国电影金鸡奖评委。
2008年，在电视剧《春草》中，奚美娟一改以知性形象，扮演一个农村母亲；7月，参演反映汶川地震的纪实性电视连续剧《震撼世界的七日》；在海清、林永健主演的电视剧《王贵与安娜》中饰演安娜的母亲；12月，参演黄海波主演的谍战剧《黑三角》，饰演反派角色“于黄氏”。
2010年9月，在张艺谋电影《山楂树之恋》中饰演静秋的母亲；2011年4月，参演贾一平主演的年代商战剧《大浴堂》
2012年，与宋春丽、陈瑾主演反映国共内战电视剧《大地情深》。
2013年11月，参演赵宝刚执导的都市情感话题剧《老有所依》在浙江、东方、北京、天津四大卫视播出，奚美娟饰演慈母谢亚芝。
5.0电视剧